Page 130 - 《广西植物》2020年第6期

８ ７ ６ 广 西 植 物 ４０ 卷
为模板ꎬ在茶树基因组数据库搜索比对得到一条
相似性最高(５７.８６％)ꎬ且含有完整编码框的基因
序列ꎮ 在 ＮＣＢＩ 分析该段序列发现第 ３７ 至第 ３４３
位氨基酸是吡哆醛激酶功能域ꎬ属于核糖激酶超
家族ꎮ 随后设计克隆引物ꎬ以茶树总 ＲＮＡ 反转录
得到的 ｃＤＮＡ 为模版ꎬＰＣＲ 扩增得到一条清晰明
亮的单一条带ꎬ大小约为 １ ２００ ｂｐ( 图 １)ꎬ测序正

确后ꎬ将此序列命名为 ＣｓＰＬＫꎬ其编码框长１ １７９
ｂｐꎬ编码含有 ３９３ 个氨基酸残基的蛋白质ꎬ蛋白质
的分子量为 ４３.９ ｋＤａꎬ理论等电点 ６.５１(图 ２)ꎮ
２.２ 茶树 ＣｓＰＬＫ 的序列分析
使用 ＤＮＡＭＡＮ 构建 ＣｓＰＬＫ 在原核表达中的图 Ｍ. ＤＮＡ 标记ꎻ １. ＣｓＰＬＫꎮ
谱(图 ３)ꎮ 将 ＣｓＰＬＫ 与其他植物中的 ＰＬＫ 进行序 Ｍ. ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒꎻ １. ＣｓＰＬＫ.
列比对(图 ４)ꎮ 发现 ＣｓＰＬＫ 与植物的 ＰＬＫ 序列具 图 １ ＣｓＰＬＫ 的 ＰＣＲ 扩增结果
Ｆｉｇ. １ ＰＣＲ ｒｅｓｕｌｔ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＣｓＰＬＫ
有高度的一致性ꎬ与拟南芥(Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ)、

图 ２ ＰＬＫ 核酸序列及氨基酸序列
Ｆｉｇ. ２ ＰＬＫ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ