Page 145 - 《广西植物》2023年第7期
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７ 期 骈永茹等: 巨大侧耳原生质体制备条件的优化 １ ３ １ ３
表 ３ ＰＧ４６ 菌株的正交试验结果
Ｔａｂｌｅ ３ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｆｏｒ ＰＧ４６ ｓｔｒａｉｎ
酶解温度 酶解时间 原生质体再生率
溶壁酶浓度 原生质体产量
组合 菌龄 Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ
Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ ｙｉｅｌｄ
Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｍｙｃｅｌｉａｌ ａｇｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ６ ￣１ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ( ×１０ ＣＦＵｍＬ )
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｄｕｒａｔｉｏｎ ｒａｔｅ (％)
１ １ １ １ １ ３.７８±０.９７ｃ １.２０
２ １ ２ ２ ２ １１.２２±０.９７ａ １.１５
３ １ ３ ３ ３ ８.２４±０.６３ｂ ０.２５
４ ２ １ ３ ２ ２.９４±０.５０ｃｄ ０.１０
５ ２ ２ １ ３ ２.５４±０.８９ｃｄ ０.０５
６ ２ ３ ２ １ ２.５８±０.７７ｃｄ ０.２０
７ ３ １ ２ ３ １.７２±０.３１ｄ ０.５０
８ ３ ２ ３ １ ３.９２±０.９９ｃ １.１０
９ ３ ３ １ ２ １.５６±０.６７ｄ ０.６０
Ｋ１ ２３.２４ ８.４４ ７.８８ １０.２８
Ｋ２ ８.０６ １７.６８ １５.５２ １５.７２
Ｋ３ ７.２０ １２.３８ １５.１０ １２.５０
ｋ１ ７.７３ ２.８１ ２.６３ ３.４３
ｋ２ ２.６９ ５.８９ ５.１７ ５.２３
ｋ３ ２.４０ ４.１３ ５.０３ ４.１７
Ｒ ５.３３ ３.０８ ２.５４ １.８０
主次顺序
Ａ>Ｂ>Ｃ>Ｄ
Ｐｒｉｍａｒｙ ａｎｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｏｒｄｅｒ
最优水平
Ａ１ Ｂ２ Ｃ２ Ｄ２
Ｏｐｔｉｍａｌ ｌｅｖｅｌ
最优组合
Ａ１Ｂ２Ｃ２Ｄ２
Ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
注: 大写字母 Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ 分别表示菌龄、溶壁酶浓度、酶解温度和酶解时间 ４ 个因素ꎮ 数字 １、２、３ 分别表示对应因素的 ３ 个水平ꎮ
小写字母 ａ、ｂ、ｃ、ｄ 表示原生质体产量有显著差异(Ｐ<０.０５)ꎮ 下同ꎮ
Ｎｏｔｅ: Ｔｈｅ ｃａｐｉｔａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ Ａꎬ Ｂꎬ Ｃ ａｎｄ Ｄ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｆｏｕｒ ｆａｃｔｏｒｓꎬ ｍｙｃｅｌｉａｌ ａｇｅꎬ ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎꎬ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ａｎｄ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｄｕｒａｔｉｏｎꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒｓ １ꎬ ２ ａｎｄ ３ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ
ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ａꎬ ｂꎬ ｃꎬ ｄ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ ｙｉｅｌｄ (Ｐ<０.０５). Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
表 ４ ＰＧ４６ 菌株的方差分析 程度依次为菌龄>酶解时间>酶解温度>溶壁酶浓
Ｔａｂｌｅ ４ Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＧ４６ ｓｔｒａｉｎ
度ꎬ且各因素影响差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ
Ⅲ型
平方和
来源 自由度 ３ 讨论与结论
Ｓｕｍ ｏｆ Ｆ Ｐ
Ｓｏｕｒｃｅ ｄｆ
ｓｑｕａｒｅｓ
ｏｆ Ｔｙｐｅ Ⅲ
本研究采用单因素实验和正交试验的方法ꎬ
菌龄 Ｍｙｃｅｌｉａｌ ａｇｅ ２７１.３６３ ２ ２２４.８０４ ０.０００
对 ２ 株不同温型的巨大侧耳菌株原生质体制备的
溶壁酶浓度
７１.６６２ ２ ５９.３６６ ０.０００
Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ 关键因素(菌丝体菌龄、稳渗剂种类、溶壁酶浓度、
酶解温度 酶解温度和酶解时间)进行优化ꎬ以期明确巨大侧
Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ６１.４８６ ２ ５０.９３６ ０.０００
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 耳原生质体制备的适宜条件ꎮ 结果表明ꎬ组合 ２
酶解时间 是 ＰＧ４６ 的最适组合ꎬ组合 １、２、３ 是 ＰＧ７９ 的适宜
２４.９３９ ２ ２０.６６０ ０.０００
Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｄｕｒａｔｉｏｎ
条件组合ꎬ而组合 ３ 条件下再生率为 ０ꎬ因此 ＰＧ７９
误差 Ｅｒｒｏｒ ２１.７２８ ３６
的最适条件是组合 １ 和组合 ２ꎮ 因此ꎬ组合 ２ 可同
总计 Ｔｏｔａｌ １ ２７４.６５０ ４５
时作为 ＰＧ４６ 和 ＰＧ７９ 的适宜条件ꎮ 同时也说明ꎬ
